Поиск
Архивы

Вы просматриваете архив рубрики «ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА».

Архив рубрики «ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА»

postheadericon Определение лекарственной чувствительности микобактерии туберкулеза

При развитии туберкулезного процесса после подкожного заражения в области введения материала к концу месяца прощупываются увеличенные лимфатические узлы. Аллергические реакции определяются при внутрикожном введении 0,1 мл АТК 1 : 10. При положительной биологической пробе у свинок развивается генерализованный туберкулез.
Определение лекарственной чувствительности микобактерии туберкулеза
Определение лекарственной чувствительности производится путем посева выделенной от больного культуры микобактерий туберкулеза на питательные среды (полусинтетические, кровяные или плотные), содержащие различные .концентрации антибактериальных препаратов. Если в патологическом материале имеется значительное количество микобактерий (определяемое бактериоскопически), рекомендуется прямое определение чувствительности, т. е. непосредственный посев на среды с антибактериальными препаратами соответственно обработанного патологического материала.
Лекарственночувствительные микобактерии растут лишь в определенных для того или иного препарата пределах концентраций. Микобактерии, растущие при большем содержании препарата в питательной среде, относятся к лекарственноустойчивым.
Подробно антибактериальные препараты будут рассмотрены в главе «Лечение туберкулеза».

postheadericon Биологическая проба

В последние годы в связи с широким применением противотуберкулезных препаратов в 1920% случаев наблюдается диссоциация между обнаружением микобактерий туберкулеза при бактериоскопическом исследовании и ростом их при посеве патологического материала. Это явление заключается в том, что видимые под микроскопом БК оказываются нежизнеспособными, и поэтому они не растут на питательных средах. Такая диссоциация обусловлена воздействием па микобактерии туберкулеза лекарственных препаратов.
Биологическая проба. Наиболее чувствительным методом, выявляющим микобактерии туберкулеза, является заражение морских свинок. Однако не всегда удается получить развитие генерализованного туберкулеза у свинки в тех случаях, когда в патологическом материале содержатся микобактерии туберкулеза, устойчивые к препаратам гидразида изоникотиновой кислоты. В таких случаях микобактерии оказываются невирулентными для этих животных, и тогда при положительном результате посева патологического материала имеет место отрицательный исход заражения.
Патологический материал используют для заражения либо без предварительной обработки (если он не содержит неспецифической микрофлоры), либо его обрабатывают 2% раствором серной кислоты, центрифугируют и осадок 23 раза отмывают физиологическим раствором. При заражении материал вводят подкожно, внутрибрюшинно или в яичко животного.

postheadericon Патологический материал

Так как обычно в посевном материале содержится и неспецифическая микрофлора, требуется его так обработать, чтобы уничтожить сопутствующую микрофлору и сохранить при этом жизнеспособность БК.
Патологический материал обрабатывают 23% раствором серной кислоты (в равном объеме) и центрифугируют. Контакт кислоты с обрабатываемым материалом не должен превышать 1520 мин. Можно обрабатывать материал и щелочью. В таких случаях к материалу добавляют двойной объем 10% раствора трехзамещенного натрия фосфата и ставят в термостат на 2224 ч, а затем центрифугируют и осадок засевают на плотные яичные среды Левенштейна Иенсена или Гельберга.
Известным недостатком этого метода является медленный рост микобактерий туберкулеза, который выявляется чаще на 34й неделе, но может быть и более замедленным.
Применяются также посевы на жидкие питательные среды кровяные, полусинтетические. При посеве на эти среды материал обрабатывают 23% серной кислотой, осадок дополнительно промывают дистиллированной водой; рост микобактерий отмечается обычно на 1012й день после посева. Этот метод в настоящее время мало применяется, так как отсутствие макророста не позволяет провести дальнейшее изучение культур.
С целью совершенствования бактериологических метотов исследования в ряде стран ведутся работы по созданию новых и модификации имеющихся питательных сред для культивирования БК, позволяющих ускорить рост последних и увеличить процент высеваемости.

postheadericon Люминесцентный метод

Для люминесцентного исследования пользуются либо специальным микроскопом (МЛ1 и МЛ2), либо обычным микроскопом типа МБИ1 с добавочным осветителем. Ко всем комплектам осветительной аппаратуры прилагаются наборы необходимых светофильтров.
Люминесцентным методом исследуют различный патологический материал. Фиксированные над пламенем препараты окрашивают при легком подогревании в течение 15 мин специальной смесью: аурамин 000,5 г, радомин С 0,05 г на 1000 мл дистиллированной воды. Затем мазок промывают водой и в течение полминуты обесцвечивают 3% солянокислым спиртом, снова промывают водой и докрашивают для гашения фона 0,25%о раствором метиленовой сини. При люминесцентной микроскопии микобактерии флюоресцируют золотистожелтым цветом на темном нефлюоресцирующем фоне.
Бактериологические методы
Больной туберкулезом в процессе антибактериального лечения может выделять микобактерии туберкулеза в небольшом количестве или измененные, и тогда бактериоскопические методы (обычная бактериоскопия, метод флотации, люминесцентная микроскопия) оказываются недостаточными для обнаружения. Поэтому в комплекс исследований, направленных на обнаружение БК, в настоящее время обязательно включается посев патологического материала. Выделение культур микобактерий туберкулеза позволяет определить жизнеспособность возбудителя, его лекарственную чувствительность, ферментативную активность и вирулентность.
Для бактериологического исследования также может быть использован любой патологический материал.

postheadericon Метод флотации

Метод флотации. Этот метод применяется в случаях скудного содержания БК в исследуемом материале и ппч отрицательном результате бактериоскопии. По сравнению с обычной бактериоскопией БК обнаруживаются методом флотации в патологическом материале примерно на 1015% чаще. Для исследования методом флотации мокроту в количестве 1215 мл помещают в бутылку емкостью 250 мл, добавляют примерно равное количество 0,5% раствора едкого натрия или калия и для лучшей гомогенизации встряхивают 510 мин, затем до половины бутылки наливают дистиллированную воду и 0,5 мл ксилола или обычного профилированного бензина. Все содержимое бутылки еще раз встряхивают 510 мин, после чего до горлышка бутылки доливают дистиллированную воду. Спустя 3060 мин капельки бензина (ксилола) всплывают на поверхность, увлекая за собой БК, концентрируя их в небольшом объеме образовавшегося на поверхности кольца. Полученное флотационное кольцо пипеткой переносят на два предметных стекла. Один препарат окрашивают по Цилю Нильсену.
При флотации промывных вод, гноя, экссудата, спинномозговой жидкости и другого материала, не требующих гомогенизации, к ним добавляют меньшее количество раствора щелочи (от 12 капель до I2 мл в зависимости от количества материала). В дальнейшем поступают так же, как при флотации мокроты.
Люминесцентная микроскопия. Метод люминесцентной микроскопии основан на способности микобактерий туберкулеза, окрашенных флюорохромами, светиться под воздействием синефиолетовых лучей.
Этот метод позволяет дополнительно выявлять микобактерии туберкулеза чаще на 17% по сравнению с обычной бактериоскопией и на 8% чаще по сравнению с методом флотации. При люминесцентной микроскопии исследование производится при малом увеличении, что расширяет поле зрения и способствует обнаружению БК, содержащихся в материале в небольшом количестве.